Rapidcal.Immuno脫鈣液

近年來血液病呈高發(fā)趨勢，骨髓穿刺活檢更廣泛地應用于臨床。骨髓活檢制片及免疫組化的質(zhì)量，對骨髓病理診斷起著極其重要的作用。為此，我們選用美國進口的Rapidcal.Immuno脫鈣劑對臨床骨髓活檢標本進行脫鈣、制片及做相應的免疫組化染色，結(jié)果顯示其具有脫鈣迅速、組織損害極小、并有效保留了細胞的免疫原性的特征。

1 材料與方法

選自病理科近一年來的骨髓活檢標本30例，均為 Bouin固定液，固定>12h。將固定后骨髓標本從中間處分成兩段，采用下面不同方式脫鈣，脫鈣液均大于標本體積4倍。一段選用常規(guī)8%硝酸室溫脫鈣2h。另外一段選用美國Lymed公司生產(chǎn)專利產(chǎn)品Rapidcal.Immuno室溫脫鈣2h。所有脫鈣后標本均置于流水中沖洗10min，常規(guī)脫水、透明、浸蠟及包埋切片，進行HE及免疫組化染色。標記物為CD3、CD4、CD79a和CD20，常規(guī)高壓修復，Polymer法檢測，DAB顯色（以上試劑均購自北京中杉金橋生物技術有限公司）。

2 結(jié)果

Rapidcal.Immuno脫鈣處理的骨髓標本，易于2?m連續(xù)完整切片，鏡下結(jié)構清晰，細胞核與漿顏色鮮艷；常規(guī)硝酸脫鈣的骨髓標本，鏡下細胞核與漿顏色對比不明顯，染色質(zhì)不清晰。免疫組化實驗中，Rapidcal.Immuno脫鈣處理的骨髓標本，CD3、CD4、CD79a、CD20所標記的T細胞和B細胞定位準確，陽性表達強，背景清晰。常規(guī)硝酸脫鈣的骨髓標本，抗原部分丟失，標記物陽性結(jié)果表達較弱，背景有部分非特異性著色。

3 討論

目前，常用的化學脫鈣方法有強酸、螯合劑等。螯合劑多為乙烯二胺四乙酸，其性質(zhì)溫和，pH値近中性，但其脫鈣時間較長，多在40h以上，不適宜病理科常規(guī)骨髓活檢標本。強酸如：鹽酸、硝酸等可以快速有效的去除骨髓組織中鈣鹽，脫鈣時間短，但雖經(jīng)流水沖洗，殘留的酸性物質(zhì)不利于細胞核著色，核漿對比不清晰，不利于形態(tài)學觀察。此外細胞表面抗原是蛋白分子，強酸會引起蛋白分子結(jié)構發(fā)生改變，抗原表位發(fā)生丟失，而使免疫組化染色結(jié)果靈敏度降低，影響病理診斷。

Rapidcal.Immuno主要成分為礦物酸及緩沖液。具有螯合劑及強酸脫鈣劑的優(yōu)勢，脫鈣迅速有效，骨髓穿刺標本1-2h即可達到良好脫鈣效果。突出特點是這種脫鈣劑中的礦物酸與緩沖液的配合，避免了對造血細胞表面蛋白的破壞，最大限度的保留了細胞的免疫原性，并保留大部分抗原表位，對造血細胞中CD系列標記物的檢測，靈敏性及特異性高，明顯優(yōu)于強酸處理的骨髓標本，為病理診斷提供了可靠依據(jù)。（目錄編號：ZLI-9307 進口脫鈣液）

HE差

HE好

免疫組化CD79a差

免疫組化CD79a好